ELISA疑难解答

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  关于没有验证过的样品类型，检测信号或许削弱或没用验证过的样品类型作为阳性对照一同进行检测。

  运用直接或直接 ELISA 办法增强检测肽的才能，将肽偶联到大的载体蛋白上，然后包被到微量滴定板。

  保证在正确温度下进行孵育。一切试剂（包含孔板）在进行试验前应处于室温，或试剂的试验计划所主张的温度。

  保证样品制备保持一致，运用最优的样品保存条件（例如尽或许削减重复冻融）。

  运用恰当的关闭缓冲液，例如 BSA 或 5-10% 正常血清，假如是直标一抗，运用与一抗种属相同的血清，假如对错直标一抗，则运用与二抗种属相同的血清。保证孔已经过预处理，以避免非特异性附着。

  替换更活络的检测系统（例如从比色检测转变为化学发光/荧光检测）。替换更活络的测定办法（例如从直接 ELISA 办法转变为夹心 ELISA 办法）。延伸孵育时间或升高温度。

  关于没有验证过的样种类属，检测信号或许削弱或没有。运用验证过的样品类型作为阳性对照一同进行检测。

  承认试剂中是不是真的存在搅扰性化合物。例如，抗体中的叠氮化钠会按捺 HRP 酶，在血浆中用作抗凝剂的 EDTA 会按捺酶反响。

  基质效应是样品中除剖析物外的一切组分对特定剖析物检测时发生的归纳效应。 运用 ELISA办法对血浆和血清进行定量时，偶然会遇到基质效应所形成的问题。基质效应或许由多种基质组分引起，包含但不限于：内源性生物成分之间的相互效果，例如磷脂、碳水化合物和内源性代谢物（胆红素），或方针剖析物与基质之间的相互效果，例如共价结合到血浆蛋白。这会导致过错的样品读值。

  1）样本处理：将样品稀释 2 至 5 倍可下降基质效应。由于抗原和捕获/检测抗体之间的结合效果很强，样品浓度被稀释并不影响它们的结合，而形成基质效应的非特异结合的力要弱许多，经过稀释样品，非特异结合形成的搅扰会逐渐削减。

  2）测验换稀释液：留意稀释样品时应运用与规范曲线）优化试验系统：挑选正真合适的试剂浓度，添加洗刷过程以及调整关闭缓冲液等。