发布日期: 2024-05-09 00:15:49 来源:新产品展示
最近做转染手气都不可,我上星期做的转染功率低得不幸,实属难姐难弟了!晚上咱们加班复盘下近期的试验,看看哪里出了问题
细胞转染试验其实并没幻想中简略,快来看看咱们难姐难弟今夜复盘总结出的硬核干货,一同查缺补漏,进步转染功率吧!(文末有转染试剂试用,实在用户反应优质运用体会)
细胞类型不同,转染功率也会有所差异。一般来说最简单培育和转染的是 HEK-293 细胞系,此外,贴壁细胞比悬浮细胞简单转染;增殖速度快的细胞比处于停止期的细胞简单转染;细胞系比原代细胞更易转染。
细胞密度也会影响转染功率。不同的转染试剂或许细胞类型,要求转染时的最适细胞密度各不相同。一般当细胞密度到达 60%~80% 时进行转染能获得较高的转染功率,过低或过高都会影响转染作用。
细胞状况也最重要,应尽量运用适度传代的细胞系,培育进程中一定要防止细菌,支原体或线. 转染载体
转染载体的巨细、质量和用量也会影响转染功率,关于不同巨细的载体需求优化不同的试验参数或用量,需求对质粒的浓度、纯度和构象、RNA 是否降解等进行严厉的质量把控。
转染试剂毒性太大,会按捺细胞正常成长,乃至导致很多细胞逝世。因而,应优先选用温文且毒性较低的转染试剂。不同试剂对细胞的要求不同,运用转染试剂的时分必定要看说明书。
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注:每次转染前需进行预试验,以探索最佳条件,尤其是转染试剂的最佳用量。以下以 DNA 为例,siRNA、mimics 等其他核酸操作相同。
注:对部分灵敏细胞,主张转染 6~8 小时后更换新培育基,以下降细胞毒性
经过不一样的品牌的转染试剂,将 1 ug 的绿色荧光质粒转染入不同的细胞中,48 小时后调查细胞中荧光表达状况。
在 9 种不同的细胞系上运用了相同质量的绿色荧光蛋白表达质粒。Umibio 的 LipoP30 的转染试剂的效价不亚于世界 R 品牌的转染试剂,在单个细胞系上的转染才能更胜一筹。
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