发布日期： 2024-03-26 04:27:57 来源：HPLC法检测
试剂盒选用双一步夹心法酶联吸附实验（ELISA）。往预先包被白蛋白（ALB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），核算样品浓度。
辣根过氧化物酶：过氧化物酶（HRP）广泛散布于植物中，辣根中含，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的铵溶液。酶蛋白和辅基吸收光谱分别为275nm和403nm。
双夹心：本法大多数都用在检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病（IBDV）的双夹心ELISA为例介绍本法的操作程序。① 加包被 → 4℃过夜，洗刷三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗刷三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 30分钟，洗刷三次、抛干④ 加底物液→ 37℃ 15分钟，加停止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩下板条用自封袋密封放回4℃。
5.弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗刷液，静置1min，甩去洗刷液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
7.每孔参加停止液50μL，15min内，在450nm波利益测定各孔的OD值。
制作曲线：在Excel作业表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，制作出品线性回归曲线，按曲线方程核算各样本浓度值。
直接ELISA：本法大多数都用在检测。（DVH）的ELISA为例，直接ELISA的操作程序如下。⑴ 资料① 包被液、洗刷液、保温液、底物液、停止液；② DVH包被抗原、酶标抗、阴性及阳性DVH参阅；待检鸭；③ ELISA检测仪、加样器、聚微量板。⑵ 过程① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗刷三次、抛干② 加待检 → 37℃ 2小时，洗刷三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 2小时，洗刷三次、抛干④ 加底物液→ 37℃ 30分钟，加停止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并核算出P/N比值。⑶ 成果断定已知阳性与已知阴性的比值（P/N）≥2.1，并且已知阳性的OD值≥0.4；在上述条件建立的情况下，假如待检与已知阴性的比值（P/N）≥2.1，并且待检的OD值≥0.4，则判为阳性，不然判为阴性。
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