人白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒试验原理

  本试剂盒用于测定人血清、血浆、安排匀浆及相关液体样本中白细胞介素1β（IL-1β）的含量。

  本试剂盒运用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素1β（IL-1β）水平。用纯化的人白细胞介素1β（IL-1β）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中顺次参加人白细胞介素1β（IL-1β），再与HRP符号的检测抗体结合，构成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过完全洗刷后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的效果下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的人白细胞介素1β（IL-1β）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），经过标准曲线核算样品中人白细胞介素1β（IL-1β）含量。

  1. 血清：室温血液天然凝结10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保存过程中如呈现沉积，应再次离心。

  2. 血浆：应依据标本的要求挑选EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保存过程中如有沉积构成，应该再次离心。

  3. 尿液：用无菌管搜集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清，保存过程中如有沉积构成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

  4. 细胞培养上清：检测排泄性的成份时，用无菌管搜集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度到达100万/ml左右。经过重复冻融，以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成，应再次离心。

  5. 安排标本：切开标本后，称取分量。参加必定量的PBS，PH7.4。用液氮敏捷冷冻保存备用。标本消融后仍就坚持2-8℃的温度。参加必定量的PBS（PH7.4），用手艺或匀浆器将标本匀浆充沛。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。细心搜集上清。分装后一份待检测，其他冷冻备用。

  6. 标本收集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行试验。若不能立刻做试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免重复冻融.

  7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3按捺辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

  1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。

  2. 加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。

  6. 洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

  7. 显色：每孔先参加显色剂A50μl，再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色15分钟.

  9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，依据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释

  倍数；或用标准物的浓度与OD值核算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，核算出样品浓度，再乘以稀释

  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在运用前也要在室温平衡60分钟。

  2. 浓洗刷液可能会呈现结晶分出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。

  3. 各步加样均应运用加样器，并常常校正其准确性，以避免试验误差。一次加样时刻最好控制在5分钟内，如标本数量多，引荐运用排枪加样。

  4. 请每次测定的一起做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔榜首孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必定倍数（n倍）后再测定，核算时请最终乘以总稀释倍数（×n×5）。

  2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要替换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免穿插污染。

  4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液现已失效，不得运用。

  5、停止液加样次序与底物溶液加样次序共同，参加停止液后，蓝色底物产品，会瞬间变为黄色。

  7、一切液体组分，运用前充沛摇匀，严厉依照说明书标明的时刻、加样量及加样次序进行温育操作。

  8、检测必定要契合试验室办理标准的规则，严厉避免穿插污染，一切样品、洗弃液和各种废弃物都应依照感染物进行处置。