发布日期： 2024-02-07 14:02:36 来源：HPLC法检测
ELISA运用了学原理和化学反应显色原理，需要将抗原或预包被在固相载体表面，使后来形成的抗原--酶 (荧光基团) -底物复合物黏附在载体上，通过检验测试OD值或发光值，来检测靶蛋白的含量。
ELISA试剂盒的实验原理.ELISA试剂盒的实验原理是建立在抗原与学反应的基础上的，同时结合了酶的催化作用。其基础原理包括三个方面：1.抗原或能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其学活性。2.抗原或可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其学和酶学活性。3.酶结合物与相应抗原或结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。ELISA法一种原因是建立在抗原与学反应的基础上，因而具有特。而另一方面又由于酶标记抗原或是酶分子与抗原或分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具备极高的性。因此，ELISA法是一种既又特异的。
酶联吸附法（ELISA）的优点包括：1.高灵敏度：ELISA可以检测出微量的抗原或，它的灵敏度通常比其他学更高。2.高特：ELISA仅与特定的抗原或结合，因此不易受到其他的，具有较高的特。3.快速：ELISA操作简单便捷、快速，可以在极短的时间内结果.4.易操作：ELISA实验操作相对简单，易于化和自动化，因此适合于大规模样品的检测。5.应用范围广：ELISA可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、多肽、等，因此在医学、生物领域广泛应用。6.无放射性核素污染：与放射测定法相比，ELISA不需要使用放射性核素，因此更为安全、环保。总之，ELISA是一种高灵敏度、高特、快速、易操作的学技术，具有广泛的应用前景。
酶联吸附法（ELISA）的优点包括：1.高灵敏度：ELISA可以检测出微量的抗原或，其灵敏度通常比其他学更高。2.高特：ELISA仅与特定的抗原或结合，因此不易受到其他的，具有较高的特。3.快速：ELISA操作简便、快速，可以在短时间之内结果.4.易操作：ELISA实验操作相对简单，易于化和自动化，因此适合于大规模样品的检测。5.应用场景范围广：ELISA能够适用于检测多种生物分子，如蛋白质、多肽、等，因此在医学、生物领域大范围的应用。6.无放射性核素污染：与放射测定法相比，ELISA不需要用放射性核素，因此更为安全、环保。总之，ELISA是一种高灵敏度、高特、快速、易操作的学技术，具有广泛的应用前景。
ELISA试剂盒的用法包括以下步骤：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀释包被抗原至5μg/ml，酶标板中每孔加入50μl，室温、4℃或37℃过夜包被。2.洗涤：弃包被液（拍干，再用无尘纸吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗涤液洗板3次（每孔均要加满），每次3min~5min。3.封闭：每孔加封闭液（1%BSA）250μl，37℃封闭2h。4.洗涤：用1×PBST洗涤液洗板3次，每次3min~5min。5.加样：加入已经稀释好的样品，37℃反应1h。一般样本加入50-100μl，充分混匀。6.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。7.加入酶标试剂：每孔加入100μl酶标溶液，37℃，1h。8.洗涤：用洗涤液洗板3次，每次3min~5min。9.显色：每孔先加入显色剂A液50μl，再加入显色剂B液50μl，37℃避光10-15min。10.终止及测定：加入50μl终止液，终止反应，用酶标仪在450nm波长处测OD值。
1. 工作：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟，使试剂盒恢复至室温。同时好实验所需的材料和。2. 加样：在酶标板的弟1个孔中加入品50μL，然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。3. 温育：将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。4. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内。5. 加酶：在每个孔中加入酶标物100μL。6. 温育：再次将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。7. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内。8. 加底物：在每个孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。9. 终止反应：在每个孔中加入终止液50μL。10. 检测：用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度（OD值）。
根据品和样本的OD值，绘制曲线，从而计算出样本中角蛋白1（KRT1）的浓度。具体分析可参剂盒说明书或相关文献。
1. 在操作中，应保持酶标板的干燥，避免水分进入孔内。2. 加样时需确保加样准确、无气泡产生。3. 温育和洗涤中需严控时间和温度，确保实验结果的准确性。4. 在使用酶标仪读取OD值时，需确保波长设置正确，避免误差产生。5. 在整个实验中，需保持操作的清洁和整洁，避免交叉污染。