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转染效率低、细胞还死了一半到底谁能来救救我!

发布日期: 2024-06-10 12:12:17 来源:开云手机app平台下载

  说起实验室的老大难问题,细胞转染必须算一个。作为被导师一直 push 出结果的实验人谁不想一把子拥有转染效率高,细胞活力好,省事又省力的丝滑转染体验。

  今天,我们走访了 A 大的细胞重点实验室,收集了大家在转染过程中呼声最高的几个的问题,我们也请教了几位有资深转染经验的师兄师姐,看看他们给大家支的小妙招。(文中含试用福利和惊喜彩蛋哦~):

  可以考虑在转染前提前更换一次预热的 37℃ 培养基。脂质体和 DNA/RNA 的转染混合物建议从培养皿一边到另一边逐滴滴下来。边滴边轻摇培养皿,确保分布均匀。关注下这种小细节,对转染细胞 nice 一点,没准下次转染效率就能提高哦。

  慢病毒感染后,细胞状态有时会变得不好,这样一个时间段可以从哪些方面考虑原因啊?

  首先确定细胞有没有污染,比如细菌污染或者支原体污染;也可以从细胞 MOI 入手,查阅资料看一下转染细胞系的 MOI 值,不同细胞系 MOI 值不同,所需的病毒量也不一样哦,可以摸索条件寻找最适病毒量;还有细胞传代数(细胞传代数不可过多)、尝试增加血清量等方面来改善哦。

  最大的困难就是遇到难转染的细胞,比如免疫细胞,原代细胞,干细胞这种,转染效率实在是太低了。

  这个时候能考虑更换选择更好更适合的转染试剂;不过针对这种难转染的细胞问题,还是更推荐使用电转仪,操作便捷,一步到位攻克转染老大难问题,让你转染省心又省力~

  看,这不来了?隔壁实验室导师就体恤学生转染之苦,新引进了一台 Invitrogen™ Neon™ NxT 电转染系统,分分钟解决各位实验人转染过程中的各种疑难杂症,从此烦恼不在,转染再不是事儿~

  Invitrogen™ Neon™ NxT 电转染系统作为新一代电转染平台,它采用创新设计,极大简化了哺乳动物的细胞转染流程。Neon NxT 专有的移液器吸头技术通过最大化两个电极之间的距离,同时最小化其表面积,保证样本具有:

  从而实现卓越的转染效率和细胞活力。同时简单易操作,仅需 3 个步骤:吸样、电转染和分液就可以完成。夸太多都不如亲自来试一试,为了让大家都有机会体验,我们推出免费试用活动。

  点击「阅读原文」或识别下方二维码,即可申请免费试用。成功完成试用并给出试用反馈,就可以获得限量版大号鼠标垫或冰箱贴留言板,礼品数量有限,先到先得。

  我们在实验室做调研时,发现大家还会经常遇到下面这些如何来解决都跨不过的槛儿,一块儿来看看有没有你也曾为之头大过的:

  场景一:小 C 用电转仪转染原代细胞,第二天观察发现,细胞死了一大半,没有办法进行下游实验

  分析原因:传统的比色皿式电转仪,对细胞伤害较大,造成大量细胞死亡。在比色皿中进行电转,电场不均匀,pH 变化大,加上将细胞移进和移出的过程中,细胞多次经受剪切力,导致原本脆弱的细胞更加脆弱,最后导致细胞死亡。

  解决方法:对于脆弱细胞,推荐使用温和的电转系统,如 Neon NxT 电转染系统。该系统采用专有的电转染吸头技术,电极间隔较宽,且表面积极小。较小的表面积产生更均匀的电场,并且 pH 值变化极小。转染过程中产生的热量和离子较少,因此细胞生理条件不会受到严重干扰。Neon NxT 省去了将细胞移进和移出比色皿的步骤,减少细胞受到的剪切力。

  分析原因:虽然很多电转仪自带针对不一样细胞系的实验方案,但是,具体实验条件千变万化,任何微小条件都可能会影响实验结果,还需要在此基础上进行参数优化。

  解决方法:推荐选择可以灵活调节电转参数的电转仪,快速微调特定参数以优化流程。使用 Neon NxT 电转染系统,可以精确地控制重要的实验参数,无需浪费宝贵的时间去调整不重要的参数。

  原代细胞难转染?转染后细胞活力大幅度下降?好不容易的珍贵样本转染又废了?转染步骤能不能再方便点?遇到这样一些问题 Neon NxT 电转染系统能统统解决,分分钟体验科技带来的幸福感~

  与累死累活搞转染,最后结果还不好的试剂转染相比,Neon NxT 电转染系统拥有以下令人忍不住心动的优势:

  专有的电转染吸头技术,可帮助您自信地转染具有挑战性的细胞系并保持细胞活力。

  图 2. Neon NxT 电转染系统的转染效率。在 10 µL 或 100 µL 电转反应中,采用 GFP 质粒 DNA 或 GFP mRNA 转染细胞。转染效率为 GFP 阳性细胞的百分比(n=3)。注:初始T细胞仅在 100 µL 反应中进行电转。

  Neon NxT 电转染系统的电转染过程发生在移液器吸头内,而非比色皿内,最大限度地减少样本损失和细胞承受的剪切力。

  Neon NxT 系统仅需 3 个简单的步骤:吸样、电转染和分液。孔板设置模式可设置不一样参数条件,20 分钟内可对 24 份样本做电转染。

  采用 Neon NxT 电转染系统,可以精确地控制重要的实验参数,无需浪费宝贵的时间去调整不重要的参数。

  使用 Thermo Fisher Connect 上基于云平台的 Invitrogen ™ TransfectionLab ™ 应用程序优化电转参数,提高生产率与可追溯性。在输入详细实验信息后,将会生成从设计阶段开始为您的实验量身定制的分步指南。

  留言分享你在转染中遇到的问题或趣事,截止 2023 年 4 月 6 日 17:00,点赞数量前 20 名,就可以获得限量版转染徽章,快来参加吧,预祝大家实验顺利。